冰冻切片的空间转录组测序在RNA捕获、文库构建方面，需要将组织切片贴合在带有mRNA结合捕获探针的载玻片上，通过甲醛固定、H&E染色得到组织切片的形态结构。再进行透化处理，使细胞中的mRNA释放，并结合到芯片相邻的捕获探针上。将捕获的mRNA反转录合成cDNA并构建测序文库进行上机测序，从而获取基因表达信息。总体来说，空间转录组的实验流程包括：组织冻存-OCT包埋-冷冻切片-固定染色-组织透化-cDNA合成及建库-上机测序，而需要客户进行样本准备的步骤相对简单：组织冻存与OCT包埋。十二年测序经验，烈冰生物单细胞多组学领域的佼佼者。南京单细胞测序数据分析随着单细胞转录组测序技术（scRNA-S...

烈冰科技于2010年诞生之初便立足于高通量测序行业，为科研学者提供专注的测序数据分析服务，先后经历基因芯片时代、基因测序、转录组测序时代...在科技日新月异的洪流中始终独占鳌头。2018年以来，单细胞测序进入发展的快车道，烈冰作为国内首批引进单细胞实验双平台的公司，依托自主研发的NovelBrain®生物大数据分析平台，为用户提供一站式全流程的单细胞测序服务和解决方案。4年的单细胞技术的积累，烈冰已具备大鼠、小鼠、斑马鱼、猴、裸鼹鼠、水稻、拟南芥等10+物种，皮肤、脑、胰腺、脂肪、心脏、花序等50+组织类型，100+细胞类型，1000+靶标基因，10000+样本处理经验。ATCG碱基的排列组合...

冰冻切片的空间转录组测序在RNA捕获、文库构建方面，需要将组织切片贴合在带有mRNA结合捕获探针的载玻片上，通过甲醛固定、H&E染色得到组织切片的形态结构。再进行透化处理，使细胞中的mRNA释放，并结合到芯片相邻的捕获探针上。将捕获的mRNA反转录合成cDNA并构建测序文库进行上机测序，从而获取基因表达信息。总体来说，空间转录组的实验流程包括：组织冻存-OCT包埋-冷冻切片-固定染色-组织透化-cDNA合成及建库-上机测序，而需要客户进行样本准备的步骤相对简单：组织冻存与OCT包埋。从样本处理到终端数据分析，只要您需要，烈冰提供全流程的无忧服务。深圳单细胞细胞核测序服务基于10X Next ...

多样本数据合并：Fraction of Reads Kept：合并样本时，各样本根据Mapped Barcoded Reads per Cell数量计算出来的数据利用率。如果各样本间该参数值相差很大，需要进行Downsample处理，以数据量少的样本为基准将不同样本中细胞测序深度标化到同一水平，从而避免因测序深度差异导致的基因检测数量、基因表达水平的差异。烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据，深入解读数据分析结果，深入挖掘其背后的生物学意义；从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究，加速科研进程！烈冰科技成立10余年，为科研学者提供专注的测序...

基于10X Next GEM技术，单细胞免疫组库测序一次实验可以同时检测近万个细胞，可在一个样本中同时获5'端mRNA表达谱、TCR和BCR的信息，结合基因的表达谱和V(D)J数据进行复杂组织样本的是影响免疫应答分析，监测免疫疗法的效果，研究疾病发生、发展的分子机制。 烈冰单细胞免疫组库平台具备：1000+ TCR/BCR项目经验，一次实验可同时获取1000-20000个细胞的文库构建，获得转录组和免疫组数据； 具备完善的免疫组库测序和实验质控流程，获取V(D)J全长序列的配对信息；丰富的免疫组库测序和数据分析经验，实现专属个性化数据分析服务，搭配单细胞分析云平台，一键导出交互性的动态结果...

机体为响应各种应激，其细胞会从一种功能“状态”转变为另一种功能“状态”；当细胞在不同状态之间转变时，往往会经历转录重组，导致一些基因被“沉默”，一些基因被重新“唤醒”，但纯化这些瞬态细胞进行研究是很困难或不可能的；scRNA-seq拟时序分析可以让我们在不需要纯化的情况下查看这些细胞状态。拟时序分析，即根据不同细胞亚群基因表达量随时间的变化情况，构建细胞谱系发育，但这里的时间并不是真时间，而是一个虚拟的时间，是指的细胞与细胞之间的转化和演替的顺序和轨迹。即使在同一个样本中，也会存在多种不同的细胞形态。因此，不论测定了多少样本，我们都可以采用拟时序分析对样本中的细胞转化和变化进行描述。基因测序相...

当蜂巢孔内同时落入细胞和磁珠后，接下去可以往BD Cartridge板中加入细胞裂解液对细胞进行裂解，使细胞内的RNA与磁珠上的标签进行结合，完成每个细胞内RNA的捕获和标记。这时，再将捕获了RNA的磁珠进行回收，待所有质控结果确认通过后就可以进行后续的RNA反转录、cDNA第二链合成等实验操作。而BD Cartridge板则需要再进行一次成像，获得磁珠收集后的扫描图，判断磁珠是否已经被有效收集。根据每一步的质控结果，烈冰科技（NovelBio）单细胞测序实验团队会根据单细胞分选的实验结果生成实验总结报告，判断每一步骤是否通过质控，并得到捕获的单细胞数量以及双细胞比例，对整个实验进行总结评估。...

针对单细胞测序的细胞数量判断环节：主要是对细胞数量、基因表达量、测序质量进行整体描述。过滤标准：由于细胞破碎后游离RNA会释放到环境或孔中，并且测序中也会存在一些死细胞，导致数据存在background值。因此，我们需要设定一定的标准来过滤掉假细胞或死细胞。以10× Genomics为例，细胞数量判断主要通过分析UMI Counts-Barcode曲线斜率拐点，当存在多个斜率拐点的时候，结合预期UMI=500时的细胞数量进行过滤。当斜率拐点低于UMI=500的时候，选择UMI=500作为细胞的判断的标准；否则，选择和预期细胞数量非常接近的拐点作为细胞判断的位置。这样我们能够有效获得真实的并且在...

多样本数据合并：Fraction of Reads Kept：合并样本时，各样本根据Mapped Barcoded Reads per Cell数量计算出来的数据利用率。如果各样本间该参数值相差很大，需要进行Downsample处理，以数据量少的样本为基准将不同样本中细胞测序深度标化到同一水平，从而避免因测序深度差异导致的基因检测数量、基因表达水平的差异。烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据，深入解读数据分析结果，深入挖掘其背后的生物学意义；从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究，加速科研进程！烈冰生物成立于2010年，专注于单细胞测序领域...

Single Cell Sequencing技术，即利用优化后的高通量测序技术（NGS，Next Generation Sequencing）分析每一个单个细胞的序列信息，从而更高分辨率地揭示细胞间的细胞差异以及其在微环境中的功能情况。那么问题来了，如何获得单个细胞？如果无法获得单个细胞这一切都是不成立的；如何获得大批量的单个细胞？单个组织细胞群体通常在百万级别以上，如果被检测的测序细胞数量过小精确度不足；如何低成本地获得大批量单个细胞？单细胞测序成本非常高，尤其是需要测2000~3000个以上的细胞的时候，如果单个细胞的分选成本也很高，技术根本无法普及。所以，正因为这些问题的存在使得高通量测...

基于10X Next GEM技术，单细胞免疫组库测序一次实验可以同时检测近万个细胞，可在一个样本中同时获5'端mRNA表达谱、TCR和BCR的信息，结合基因的表达谱和V(D)J数据进行复杂组织样本的是影响免疫应答分析，监测免疫疗法的效果，研究疾病发生、发展的分子机制。 烈冰单细胞免疫组库平台具备：1000+ TCR/BCR项目经验，一次实验可同时获取1000-20000个细胞的文库构建，获得转录组和免疫组数据； 具备完善的免疫组库测序和实验质控流程，获取V(D)J全长序列的配对信息；丰富的免疫组库测序和数据分析经验，实现专属个性化数据分析服务，搭配单细胞分析云平台，一键导出交互性的动态结果...

单细胞测序结果动辄上百G数据量，庞大的数据对于分析平台和分析能力有着很高的要求，首先针对下机数据的质控环节：单细胞测序产生数亿的结果序列，不可避免的会出现低质量的测序结果，存在各种情况的序列污染。因此序列过滤及质量评估就会变得极为重要。序列质量主要通过测序质量值Q20/Q30的占比来表征，即碱基测序结果的错误率在1% / 0.1%以下的比例。理想的测序结果reads的碱基质量均高于30。保证数据获得后第一步的处理结果的准确性，为后续细胞类型鉴定准确和功能分析打下坚实基础。单细胞测序因其强大的探究疾病--细胞--基因的关系，一度成为高通量测序技术的“天花板”。上海单细胞BCR测序服务机构同恒检测...

Single Cell Sequencing技术，即利用优化后的高通量测序技术（NGS，Next Generation Sequencing）分析每一个单个细胞的序列信息，从而更高分辨率地揭示细胞间的细胞差异以及其在微环境中的功能情况。那么问题来了，如何获得单个细胞？如果无法获得单个细胞这一切都是不成立的；如何获得大批量的单个细胞？单个组织细胞群体通常在百万级别以上，如果被检测的测序细胞数量过小精确度不足；如何低成本地获得大批量单个细胞？单细胞测序成本非常高，尤其是需要测2000~3000个以上的细胞的时候，如果单个细胞的分选成本也很高，技术根本无法普及。所以，正因为这些问题的存在使得高通量测...

针对单细胞测序的细胞数量判断环节：主要是对细胞数量、基因表达量、测序质量进行整体描述。过滤标准：由于细胞破碎后游离RNA会释放到环境或孔中，并且测序中也会存在一些死细胞，导致数据存在background值。因此，我们需要设定一定的标准来过滤掉假细胞或死细胞。以10× Genomics为例，细胞数量判断主要通过分析UMI Counts-Barcode曲线斜率拐点，当存在多个斜率拐点的时候，结合预期UMI=500时的细胞数量进行过滤。当斜率拐点低于UMI=500的时候，选择UMI=500作为细胞的判断的标准；否则，选择和预期细胞数量非常接近的拐点作为细胞判断的位置。这样我们能够有效获得真实的并且在...

相对于Smart-Seq技术在细胞数量上的问题，BD和10X这两个平台普遍提供的细胞数量都在1-6K不等的测序细胞量，这个量级的测序细胞量已经可以说能够完全覆盖绝大部分组织的Single Cell群体类型。因此，这两种技术对于基于基因表达进行准确细胞分型上，无论是从细胞数量上来说还是表达检测可靠性来说，都会更实用。同时依托Random Cell Label技术，使得其对于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等设备存在的Index hooping现象，相对于Smart-Seq数据来说，影响几乎可以忽略不计（10X Genomics官方网站曾给出hooping测试结果，显示...

烈冰生信团队倾情研发的NovelBrain®生信大数据分析平台，可实现零代码操作、简单方便：单细胞浏览器的操作简单，不需要命令行操作。简单拖拽、设置参数即可运行，即使生信0基础用户也可以运用自如；可视化展示海量结果文件：可视化展示Cluster的基因数，UMI数量、线粒体RNA占比信息；以及不同Cluster对应的细胞数量、基因表达量、RNA表达量、样本细胞分布、线粒体RNA表达量等；3D立体展示，文章动图先人一步：单细胞浏览器针对t-SNE图、UMAP图和pseudotime结果进行三维立体展示，更加直观立体的观察细胞分布和聚类情况。ATCG碱基的排列组合构成了测序的庞大世界。全转录组测序技...

免疫组库测序有必要做吗？ 对于十的十二次方个以上的抗原识别基数来说，群体和个体间的免疫组库的丰富程度能够直接反应机体免疫系统情况，通常TCR/BCR的亚型越多，机体识别病原的能力越强，越不容易患病，但超过一定限度，也容易引发自身免疫性疾病。且机体的免疫组库也不是一成不变的，会随着年龄，环境，药物，患病等等因素，免疫组库多样性也时刻处于动态变化当中。由此，将免疫组库测序用于临床诊断和诊疗上，有助于对群体或个体间进行免疫监测，探究相关疾病和免疫应答的关系，监测免疫疗法的效果，研究疾病发生、发展的分子机制。基因测序相关产品和技术已由实验室研究逐渐演变到临床应用，是下一个改变世界的技术。武汉ATAC测...

空间转录组测序与单细胞测序的结果不同，这里存在一个概念叫做Number of Spots under tissue，即，空间转录组片子上组织覆盖的有效的spot位点。这个有效Spot的筛选标准是有UMI以及有序列表达。那么这个时候，贴片的质量就成为了制约空间转录组有效区域的要点了。如果组织没有很好地覆盖到空转片上，那么容易出现虽然有HE染色有组织片子，但是没有基因表达，即无有效Spot位点。同样的，另一个就是组织切片的大小，也就是说组织切片在整个玻片的覆盖面积越小，分析的有效区域就越少。这两者基本上决定了整个空间转录组分析结果的基础质量。烈冰科技已建立了基于单细胞测序的高通量测序实验多平台。南...

科研的魅力之处，在于无穷尽的探寻生命的本底，通过单细胞测序，我们对组织的分子基础的研究也从初级到深层，并在单细胞层面逐渐达成一致，那么不禁要问一句，组织的空间位置到底重不重要？空间异质性是不同疾病样本功能的关键特征，细胞的位置信息更能反应细胞命运调控机制和细胞谱系发生过程。因此时间和空间即像组织的AB面，而不可否认的是，此时空间坐标的记录，像一个还未长大的娃娃，虽未触及分子基础研究的深层，但仍在努力攀登探寻生命本底的下一个高峰。单细胞测序技术提供了单个细胞水平下的科学研究视角。上海单细胞免疫组库测序多重荧光免疫组化烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据，深入解读数据分...

RNA测序（RNA-seq）是转录组学研究的重要工具，也是生命科学领域常用的技术之一。相比于传统通路研究低维度、低通量的局限性，转录组学有以下优势：1）能够动态考察细胞基因组的表达，多维度地反映差异变化；2）可用于研究占RNA绝大部分的非编码RNA，研究其结构以及在细胞生命活动中的重要调控作用；3）与蛋白组学研究相互补充，多角度呈现细胞水平的变化信息。作为转录组学研究的技术基础，RNA测序技术也在不断地更新迭代，现如今更大通量、更深精度的测序为众多科研和医学工作者提供了丰富的工具和探索真理的手段。高通量测序技术是对传统测序一次翻天覆地的改变，一次对几十万到几百万条核酸序列进行测定。广州10X单...

基于10X Next GEM技术，单细胞免疫组库测序一次实验可以同时检测近万个细胞，可在一个样本中同时获5'端mRNA表达谱、TCR和BCR的信息，结合基因的表达谱和V(D)J数据进行复杂组织样本的是影响免疫应答分析，监测免疫疗法的效果，研究疾病发生、发展的分子机制。 烈冰单细胞免疫组库平台具备：1000+ TCR/BCR项目经验，一次实验可同时获取1000-20000个细胞的文库构建，获得转录组和免疫组数据； 具备完善的免疫组库测序和实验质控流程，获取V(D)J全长序列的配对信息；丰富的免疫组库测序和数据分析经验，实现专属个性化数据分析服务，搭配单细胞分析云平台，一键导出交互性的动态结果...

机体为响应各种应激，其细胞会从一种功能“状态”转变为另一种功能“状态”；当细胞在不同状态之间转变时，往往会经历转录重组，导致一些基因被“沉默”，一些基因被重新“唤醒”，但纯化这些瞬态细胞进行研究是很困难或不可能的；scRNA-seq拟时序分析可以让我们在不需要纯化的情况下查看这些细胞状态。拟时序分析，即根据不同细胞亚群基因表达量随时间的变化情况，构建细胞谱系发育，但这里的时间并不是真时间，而是一个虚拟的时间，是指的细胞与细胞之间的转化和演替的顺序和轨迹。即使在同一个样本中，也会存在多种不同的细胞形态。因此，不论测定了多少样本，我们都可以采用拟时序分析对样本中的细胞转化和变化进行描述。烈冰测序数...

二代测序技术在测序方法上取得了重大突破，基于“边合成边测序”（sequencing by synthesis）和大规模平行测序技术（massive parallel analysis,MPS），使测序通量和读取速度得到极大提升，烈冰生物斥巨资购置的Novaseq6000测序仪的测序原理可以简化为四步：样品文库构建、簇生成、测序和数据分析。由于读长限制，样品DNA或由RNA逆转录得到的cDNA需要被打断成300-500bp的片段，并在3'和5'端接上3种序列：1）Index，用于区分样品来源；2）Adapter，用于结合测序通道上的位点；3）Primer binding site，用于结合PCR...

基于10X Next GEM技术，单细胞免疫组库测序一次实验可以同时检测近万个细胞，可在一个样本中同时获5'端mRNA表达谱、TCR和BCR的信息，结合基因的表达谱和V(D)J数据进行复杂组织样本的是影响免疫应答分析，监测免疫疗法的效果，研究疾病发生、发展的分子机制。 烈冰单细胞免疫组库平台具备：1000+ TCR/BCR项目经验，一次实验可同时获取1000-20000个细胞的文库构建，获得转录组和免疫组数据； 具备完善的免疫组库测序和实验质控流程，获取V(D)J全长序列的配对信息；丰富的免疫组库测序和数据分析经验，实现专属个性化数据分析服务，搭配单细胞分析云平台，一键导出交互性的动态结果...

免疫组库测序有必要做吗？ 对于十的十二次方个以上的抗原识别基数来说，群体和个体间的免疫组库的丰富程度能够直接反应机体免疫系统情况，通常TCR/BCR的亚型越多，机体识别病原的能力越强，越不容易患病，但超过一定限度，也容易引发自身免疫性疾病。且机体的免疫组库也不是一成不变的，会随着年龄，环境，药物，患病等等因素，免疫组库多样性也时刻处于动态变化当中。由此，将免疫组库测序用于临床诊断和诊疗上，有助于对群体或个体间进行免疫监测，探究相关疾病和免疫应答的关系，监测免疫疗法的效果，研究疾病发生、发展的分子机制。烈冰开展了单细胞转录组、单细胞多组学以及空间转录组等多种产品在内的全套科研解决方案。广州单细胞...

多样本数据合并：Fraction of Reads Kept：合并样本时，各样本根据Mapped Barcoded Reads per Cell数量计算出来的数据利用率。如果各样本间该参数值相差很大，需要进行Downsample处理，以数据量少的样本为基准将不同样本中细胞测序深度标化到同一水平，从而避免因测序深度差异导致的基因检测数量、基因表达水平的差异。烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据，深入解读数据分析结果，深入挖掘其背后的生物学意义；从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究，加速科研进程！烈冰生物全转录组测序通过双文库构建，实现多种R...

同恒检测可以实现方法开发验证、配方成分检测、元素分析测定、综合解决方案、结构分析确证、指定成分分析、腐蚀分析、模拟实验、未知物成分分析、异物分析工业诊断、含量检测测定等服务项目，业务范围不仅涵盖了传统的日化、消费品、金属、材料、保健食品、农药、纺织、涂料、医疗；还包含了现代热点的5G通讯、人工智能、新能源产业；从精密的半导体芯片、生物制药、细菌病毒到宏观的桥梁建筑、航天工业、工业生产，同恒检测始终坚持为您提供精益求精的服务。测序可准确地分析基因表达差异、基因结构变异、筛选分子标记（SNPs或SSR）等生命科学重要问题。温州全转录组测序服务机构细胞中基因的表达是严格按照时间和空间顺序发生，因此细...

基于桥式PCR技术的簇生成可以将模版链迅速扩增成千上万倍，保证过程中足够的测序深度。测序时使用特殊标记的dNTP：1）碱基上通过敏感键修饰上不同的荧光基团，用于区分ATCG；2）3'端使用叠氮基团封闭，保证一次循环只上一个dNTP。每一轮循环结束时，会通过高速荧光显微镜记录荧光图像，再通入试剂除去荧光基团和叠氮基团，开启下一循环。通过分析读取同一位点的荧光，实时获取模版链的碱基序列。由于过程中使用的化学反应并不可控，随着循环数的增大会出现不同步的情况，因此Illumina的读长只能限制在200bp左右。烈冰智造PanoCell单细胞捕获，媲美国际主流的单细胞平台。宁波空间转录组测序技术支持科研...

空间转录组测序的数据质量和玻片有效区域的利用率、贴片的质量和透化时间息息相关。贴片质量不良会影响总的有效spot数等；而透化不合理会导致spot的reads数、基因中位数等参数。而 在特异性基因表达方面，我们也可以统计空间转录组群体的特异性基因表达即Markergene，将他们在组织切片以及空转上进行着色。我们也可以对于任意一个已知的基因或者数据库中的一些细胞Marker，然后将其在基因表达在空间转录组的切片以及HE染色上展示自己的基因表达进而了解，群体中的可能的细胞组成关系。 烈冰一站式多平台测序服务：立足科学研究，解码生命本质。广州单细胞免疫组库测序公司不同类型的细胞或者在不同的条件下，活...

烈冰与国内高校、研究所、医院和药企单位开展深度合作，服务于600+临床与研究机构，1000+客户和5000+重要科研项目，助力并联合发表300+篇CNS等国际学术期刊（不完全统计），在单细胞领域，烈冰助力用户发表单细胞文献30+篇，总IF＞300+，IF＞10+以上文章占比65%以上，包含Immunity、Nature Cell Biology、Nature Plants 、Advanced Science等生物领域国际主流学术期刊，已发表文章研究领域涵盖包括COVID-19研究、疾病发生转移机制，免疫研究、脑神经、白血病、胚胎发育、糖尿病、退行性疾病和植物领域研究等。烈冰生物为您提供一站式全...