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来源: 发布时间:2022年11月15日

β-榄香烯是从香茅草中提取的有效抗ai成分,属于倍半萜烯类成分。研究发现β-榄香烯可通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K1信号通路,增加LC3-II和Atg5-Atg12蛋白的量,诱导人非小细胞性肺aiNSCLCA549细胞发生自噬,并且可诱导细胞凋亡。研究发现,姜黄素抑制肺腺aiA549细胞增殖,增加LC3的免疫荧光点,上调LC3-II/I的比值,增加自噬相关蛋白SQSTM1的量,自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)可抑制姜黄素诱导A549细胞增殖的作用;应用AMPK抑制剂和干扰AMPKα1后,姜黄素对蛋白LC3-II/I和SQSTM1的作用被削弱,提示姜黄素诱导肺腺aiA549细胞自噬,可能与激huoAMPK通路相关。高脂饮食则会导致机体的自噬受损,从而加速非酒精性脂肪肝向肝病方向发展。安徽mRFP-GFP-LC3双荧光自噬慢病毒包装

2005年,Lemaster提出线粒体自噬的概念:细胞利用自噬活动的选择性,通过自噬溶酶体清chu细胞内衰老、损伤或功能障碍的线粒体,维持细胞内线粒体质量和数量的稳定。线粒体自噬是一种选择性自噬现象,参与调节细胞内稳态,与细胞发挥正常功能密切相关。近年来,线粒体自噬在肝脏疾病、糖尿病、心血管疾病、帕金森综合征等疾病中的研究取得了突破性进展。线粒体自噬是复杂的生理过程,在不同细胞中有多种诱导和调控机制,如酵母中的自噬相关基因(autopahgyrelatedgenes,Atg)家族蛋白诱导的调控机制及网织红细胞中NIX(Nip3-likeproteinX)介导的线粒体自噬机制等。黑龙江mRFP-GFP-LC3双荧光自噬慢病毒在自噬过程中,通过压力诱导自噬后,细胞质物质被自噬体的双膜结构隔离。

通常情况下,除了研究自噬现象本身,大家更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来,把自噬作为这些方向的一个机制来研究。通常的研究模式:1)证明自噬参与了相关研究表型(电镜、LC3II/I-WB、LC3亚细胞定位、LC3荧光示踪监测自噬流等)2)证明自噬在表型中起到关键作用(通过自噬抑制剂、激动剂进行关联研究)3)找到表型与自噬桥梁分子(检测pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成员)4)在基因层面通过gainof/lostoffunction研究桥梁分子在自噬中的作用。

自噬发生过程:在此过程中,自噬体的形成是关键,其直径一般为300~900nm,平均500nm,囊泡内常见的包含物有胞质成分和某些细胞器如线粒体、内吞体、过氧化物酶体等。与其他细胞器相比,自噬体的半衰期比较短,只有8min左右,说明自噬是细胞对于环境变化的有效反应。在整个自体吞噬过程中,细胞质和细胞器都受到破坏,较明显的是线粒体和内质网受损。虽然自体吞噬并不直接破坏细胞膜和细胞核,但是有证据表明,在较初断裂或消化后,细胞膜和细胞核会较终变成溶酶体以消化和分解自身。20 μmol/L白藜芦醇可抑制心肌细胞H9c2凋亡,诱导自噬体形成。

自噬可以抑制慢性肝炎或肝硬化向肝病转变,而自噬缺乏则可能会导致肝病发生。小鼠饥饿实验中,24h内小鼠肝脏35%的蛋白质经自噬途径降解。Takamura等研究中,ATG5或ATG7基因缺失的6~9月龄小鼠模型发生肝肿大或肝瘤,并且肝病细胞中有大量泛素化蛋白堆积,而正常肝细胞则没有;肝病的发生可能起源于自噬缺失的肝细胞,具体机制可能与线粒体肿胀、p62堆积、氧化应激、DNA损伤反应等有关。此外,在ATG7缺乏的小鼠模型中特异性下调p62表达后,表明p62堆积对肝病发生可能起促进作用。Bao等研究发现,在石蜡包埋的肝病组织切片中发现肝病细胞中有p62蛋白堆积,但周围未发生病变的正常肝细胞中则未发现p62的异常堆积。自噬功能不全的细胞易于坏死,但是坏死组织产生的细胞因子(包括部分生长因子)反而会促进病变的生长。河南细胞自噬LC3

在不利环境条件下,细胞通过自噬降解多余或异常的胞内组分,促进生物生长发育、细胞分化及应答反应。安徽mRFP-GFP-LC3双荧光自噬慢病毒包装

自噬双标系统的工作原理为:未发生自噬的细胞及含有自噬体的细胞中,由于mCherry与GFP共同表达,细胞呈现黄色荧光。当自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体后,酸性的溶酶体环境使酸敏感的GFP荧光淬灭,而mCherry不受影响,进而使自噬溶酶体呈现红色荧光。因此,红色荧光可指示自噬溶酶体形成的顺利程度。红色荧光越多,绿色荧光越少,则从自噬体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬体和溶酶体融合被阻止,自噬溶酶体进程受阻。安徽mRFP-GFP-LC3双荧光自噬慢病毒包装

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