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上海外泌体western blot

来源: 发布时间:2023年01月30日

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀,极大地降低了外泌体的提取成本,且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子,同时也表达胎盘特异性蛋白分子,证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳,银染后可见各蛋白分子条带清晰可见,动态光散射分析粒径,结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间,与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后,与细胞共孵育,荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性,进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体,并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定,为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。精ye经过长达30年的–80 °C冷冻保存, 其外泌体的形状、物理性质、 核酸蛋白含量和种类都无明显变化。上海外泌体western blot

    外泌体是肿瘤细胞与微环境之间相互通讯的重要介质。然而,外泌体在胰腺ai缺氧状态下调节tumour发展的机制在很大程度上仍然是未知的。巨噬细胞是tumour内和tumour周围醉丰富的浸润性免疫相关基质细胞,表现出不同的表型和功能。根据环境因素,巨噬细胞可以被极化为M1或M2型细胞。M1巨噬细胞是以诱导型一氧化dan合酶(iNOS)表达为特征的促炎性巨噬细胞,而M2巨噬细胞表达高水平的抗yan细胞因子(例如IL-10)和有效的精氨酸酶-1(Arg1)活性,有利于肿瘤细胞的生长。然而,巨噬细胞极化的机制在胰腺ai中仍然未知。来自上海第一人民医院的裘正军主任在CancerResearch(IF=,中科院一区)发表论文证明胰腺ai细胞来源的外泌体在缺氧微环境中表达miR-301a-3p,并且可以通过PTEN/PI3K信号通路极化巨噬细胞。巨噬细胞的极化导致体外和体内胰腺ai细胞的转移潜能增强。因此,该研究认为外泌体miR-301a-3p是一种新的介导肿瘤免疫逃避的靶标。 河南血清外泌体透射电镜检测外泌体可促进血管生成,如心肌内皮细胞来源的外泌体能够诱导细胞增殖及血管生成。

    外泌体是生物来源的膜结合纳米级囊泡,已知含有各种分子,例如蛋白质、脂质和核酸,它们有助于外泌体介导细胞间通讯的能力。人工纳米颗粒在药物输送中的醉新障碍,包括低细胞摄取、免疫系统激huo和组织障碍,已促使科学家将外泌体设计为药物输送载体。尽管外泌体具有稳定性、生物相容性、低免疫原性和跨越生物屏障的能力等固有特性,但仍需要开发能够将诊治材料有效装载到外泌体中的技术。在这里,我们介绍了一种简单的肽装备技术,可以在温和的装载环境中增强外泌体的货物装载潜力。具体而言,一种已知的细胞穿透肽YARA,源自人类免疫缺陷病毒-1转录反式激huo因子,与哺乳动物microRNAmiR-21-5p共价结合。然后将缀合物YARA-miR-21-5p与从间充质干细胞或ai细胞中分离出来的外泌体一起孵育,以进行加载。YARA-miR-21-5p的外泌体加载具有时间依赖性,并且通过孵育证明miR-21-5p的外泌体加载效率提高了倍。在有效的细胞摄取后,负载的外泌体迅速将YARA-miR-21-5p递送到哺乳动物细胞中。相对于未加载的外泌体和游离的YARA-miR-21-5p,加载的外泌体显着增强了人和小鼠成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭,这是伤口愈合的重要步骤。

外泌体作为药物或作为药物递送载体的诊治潜力正在被积极的探索。与脂质体相比,注射的外泌体可有效进入其他细胞,并可在小鼠外源性给药后以醉小的免疫清chu递送功能性分子。此外,外泌体的诊治应用前景广阔,因为它们已被证实耐受性良好。来源于间充质细胞及上皮细胞的外泌体在小鼠中重复注射时不会诱导毒性。MSC来源的外泌体已被提出是诊治本身,使用MSC来源的外泌体诊治移植物抗宿主病患者表明,重复注射耐受性良好,没有实质性副作用,未引起患者反应。外泌体在人体内分布广fan,可以穿过细胞膜,不易引起免疫反应,作为药物载体具有独特优势。

细胞外囊泡(EVs)因其生物相容性、大小适宜、体循环中保存时间长和低免疫原性等优势,在生物医学应用中得到了普遍的应用。研究发现EV比普通的细胞膜囊泡更有优势。EV的优势在于,由于其表面的跨膜蛋白(如MHC复合物)数量减少,它们的免疫原性低于其宿主细胞膜,具体的多少取决于它们的细胞来源。凋亡小体、微泡和外泌体是根据EV的生物成因进行分类的。当胞内体的膜向内萌发形成外泌体时,就产生多泡体(MVB)。当MVBs与质膜融合时,外泌体被释放到细胞外空间。一旦从细胞表面释放出来,外泌体能够与细胞外基质相互作用,或在微环境内外引发反应。将RNA和蛋白质引入外泌体,并将其定向到身体特定区域的方法仍在开发中。外泌体被认为是一种合适的药物传递系统,因为蛋白质和遗传物质都可以装载到其中。通常认为胞外囊泡为外泌体和微囊泡,分别来自核内体系统和质膜。湖南外泌体tmt

间充质干细胞来源外泌体对心肌细胞具有调控作用。上海外泌体western blot

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