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江苏组织外泌体载药

来源: 发布时间:2023年02月25日

外泌体的提取方法在外泌体载药系统中应用——免疫亲和层析法。利用生物体内存在的抗原、抗体之间高度特异性的亲和力进行分离的方法,主要用于生物大分子的分离、纯化。将其应用于外泌体的分离主要是借助外泌体表面的特异性抗体,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗体的特异性结合,只有囊泡表面有特异性的抗体才可以被识别,这使得提取的外泌体纯度高,但是产量低。分别用超速离心、密度梯度离心和免疫层析法,从血浆和细胞上清中提取外泌体蛋白,结果表明,免疫亲和层析法得到的外泌体表面存在多种标记蛋白(Alix、CD9、CD63),同时,ELISA和PCR结果也证明了该方法的可行性。HA修饰的牛奶外泌体载药体系可将药物靶向递送至CD44高表达的中流细胞中,提高对Dox的摄取效率。江苏组织外泌体载药

    外泌体载药评估载药完成后,还需要对EVs载药效果进行评估,包封率(encapsulationefficiency)、载药量(loadingcapacity)、阳性率等都可以用于EVs载药评估。包封率包封率指的是成功加载到EVs的药物量与投入制备体系中药物量的比值,是评估药物利用率的重要指标。不同的药物采用不同的装载方式,其包封率往往不同,此外,选择不同的检测方法,计算出的包封率也可能存在差异。计算公式:包封率(%)=(装载药物量/投入药物量)×100%载药量载药量指的是单位EVs(或单位数量EVs)所负载的药物量,载药量越高,后期给药时所需的EVs就越少。根据装载药物的不同,载药量的单位存在差异,负载药物总量的单位可以是摩尔数、质量、拷贝数等。例如,EVs负载siRNA时,载药量通常用copies/EV表示。阳性率阳性率指的是成功装载药物的EVs与投入制备体系中总EVs的比值,是评价EVs载药效率的重要指标。阳性率与载药量相结合,可以对EVs载药进行较为全mian的评价。计算公式:阳性率(%)=(装载药物的EVs量/总EVs量)×100% 湖北组织外泌体载药实验价格比较外泌体载药中外泌体提取的方法可联合使用各种方法,从而得到高纯度和高产量的外泌体。

多烯紫杉醇(docetaxel,DTX)是浆果紫杉针叶的提取物,属于紫杉类抗中流药物,用于乳腺ai、卵巢ai、非小细胞肺ai、前列腺ai等多种实体中流的zhiliao。多烯紫杉醇为脂溶xing药物,难溶于水,目前临床使用的多烯紫杉醇注射液使用吐温-80、乙醇作为增溶剂增加溶解度,其不良反应较大,临床应用受到很大的限制。采用电穿孔法将DTX装载至外泌体中(DTX-EXO)。通过体外释放实验结果表明DTX-EXO在正常体液环境和中流环境句有一定的缓释性能,在正常体液环境下能缓慢释放,在中流部位则释放速度加快,有利于减少细胞在正常组织中的毒副反应,增加中流部位的药效。

普通的外泌体在体内易被网状内皮系统快速qing除,难以保证载药系统在到达靶部位发挥其作用前的完整性。已有相关研究证实,使用聚乙二醇衍生物对外泌体膜进行修饰,可以屏蔽网状内皮系统的识别和摄取,延长其循环时间。Kooijmans等人将EGa1纳米抗体连接到修饰聚乙二醇的胶束表面,利用合成胶束在不同温度(4℃、40℃、80℃)下与外泌体孵育,使其插入到外泌体表面。研究结果表明,当孵育温度为40℃时能较好保持外泌体膜的完整性,而且对EG-FR受体过度表达的A431细胞有较高的结合率。将同时修饰EGa1抗体和聚乙二醇的外泌体静脉注入荷瘤小鼠体内,结果显示,在注射60min后,血浆中仍可检测到外泌体的存在。外泌体可作为天然的药物运载系统,将zhiliao分子、药物等运送至靶细胞,进而发挥zhiliao作用。

间充质干细胞(MSC)的外泌体成为有潜力的天然药物递送载体的优势:与其他来源外泌体的产生机制一致,即首先由细胞质膜内陷形成内体,然后内体向内出芽形成多泡体,而多泡体具有两种命运,一种是移动到细胞表面与质膜融合,以胞吐的方式将外泌体释放到细胞外;另一种是与溶酶体结合,将内容物降解。MSC-Exo具有外泌体的共同特征,即富含四跨膜蛋白CD9、CD63、CD81,整合素,主要组织相容性复合物Ⅰ、Ⅱ,热休克蛋白,多泡体合成相关蛋白(ALIX、TSG101),核酸,胆固醇、磷酸甘油酯、鞘磷脂等。此外,MSC-Exo还具有特异性标志物,例如,CD29、CD90、CD73和CD44等。MSC-Exo具有与MSCs相似的生物学功能,而且避免了细胞移植的风险,易于获取、储存和管理;可控性高、免疫原性低、安全性好。口服递送装载紫杉醇(PAC)的外泌体作用于人肺ai荷瘤小鼠,其中流的生长明显受到抑制。西藏外泌体载药

包载厚朴酚的外泌体比游离厚朴酚有更高的zhiliao功效,可改善细胞摄取从而提高抗中流功效。江苏组织外泌体载药

外泌体载药系统一直是众多研究者关注的焦点。将连接G11靶向肽的外泌体(G11-EXOs)用于递送中流抑制性miRNA到高表达EGFR的乳腺ai组织中。研究人员将DiR标记的G11-EXOs和未经修饰的外泌体尾静脉注射入荷瘤小鼠体内24h后,通过huo体成像观察G11-EXOs组在中流部位的荧光强度是未连接靶向肽外泌体组荧光强度的3倍,说明G11-EXOs在体内句有良好的靶向效果。随后,研究人员将let-7amiRNA包载到G11-EXOs中并静脉注射到小鼠体内,发现它能准确定位到中流组织,明显抑制中流的生长。江苏组织外泌体载药

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