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苏州单荧光自噬

来源: 发布时间:2022年11月08日

在细胞自噬的过程中,其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程,以ATG7为E1样jihuo酶(E1-like activating enzyme), 以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme),以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase),在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后,自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大,但由于其极强的疏水性,在SDS-PAGE电泳时,LC3B II比LC3B I迁移得更快,其表观分子量分别为14kD和16kD。在细胞遭受代谢应激、药物调整和放射性损伤时,自噬也是维护基因完整性的重要机制。苏州单荧光自噬

系统性红斑狼疮是一类高度异质的自身免疫病的总称,其主要特点为大量抗DNA/RNA自身抗体的出现。这些过量的抗DNA/RNA抗体的出现有许多种可能的解释,其中一种可能的原因是,细胞内部清理垃圾DNA/RNA的自噬途径受阻,导致大量垃圾DNA/RNA累积,直至超过了免疫系统对自身抗原的耐受阈值。对SLE患者的基因多态性分析表明,有一部分患者中Atg5和Atg7产生突变,提示自噬紊乱作为SLE的一种病因的可能性。另一方面,在SLE患者的T细胞中,可观测到自噬普遍上调,这可能是大量免疫原性物质刺激的结果而非原因。许多临床上用于调整SLE的药物都有阻止自噬的作用,例如羟氯喹。这些药物的调整作用,可能有一部分是通过直接阻止树突状细胞中的自噬来影响自身抗原提呈来实现的。苏州单荧光自噬自噬可影响细胞因子的产生、趋化作用等。

在自噬过程中,通过压力诱导自噬后,细胞质物质被自噬体的双膜结构隔离。这些自噬体与溶酶体融合,成为自溶体,一些被隔离的货物被降解,然后回收以维持细胞内稳态。在我们的生命中,细胞会因为氧化应激(长期使用和经久不修,会出现老化,失灵的现象,一般情况下,细胞可能会凋亡)而积累损伤,慢慢变老。随着年龄的增长,这种压力会逐渐增加,逐渐削弱细胞活力,使细胞效率降低。而自噬可以清理掉磨损的细胞,并进行更换,从而使细胞衰老的时间延长。自噬是细胞消化掉自身的一部分。

生理条件下,PINK1前体在内质网中合成后,凭借N端的线粒体定位序列被线粒体外膜转运酶识别并转入线粒体基质。当PINK1进入线粒体基质后,其N端信号肽被降解为成熟的PINK1,成熟的PINK1进入线粒体基质后被蛋白酶体识别清chu,从而维持基础水平。而线粒体受损时,线粒体膜电位发生变化,线粒体外膜去极化,阻碍PINK1进入线粒体,同时对PINK1的降解能力下降。因此,有活性的PINK1可以稳定聚集在线粒体外膜蛋白上,从而募集并激huoParkin,使其磷酸化。磷酸化的Parkin可以泛素化线粒体受体蛋白,后者泛素化后可与自噬受体调节蛋白等结合,形成泛素化的线粒体,从而激huo泛素相关的蛋白酶体途径,实现线粒体降解。异钩藤碱可诱导神经细胞自噬。

GFP-LC3B 融合蛋白不仅能够利用其荧光标签进行检测,还可利用溶酶体对标签蛋白的切割通过 Western blot进行检测。GFP-LC3B 蛋白进入到自噬溶酶体内后 LC3B 部分对溶酶体中的蛋白水解酶较为敏感,较容易被降解。而融合蛋白中的 GFP 部分则对于溶酶体中的蛋白水解酶敏感性较低,不容易被降解。使用GFP 抗体进行 Western blot 检测可能会检测到 GFP-LC3B-I、GFP-LC3B-II 和游离 GFP 标签三个条带,若出现游离 GFP 标签条带则daibiao细胞自噬流活化。此外, 在检测同一细胞样品时还可以使用 LC3B 抗体检测内源性 LC3B-I 向 LC3B-II 转化。自噬是吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解内容物的过程。吉林western blot检测自噬流

远志皂苷B通过Atg7调节和AMPK-mTOR信号通路诱导PC12细胞自噬。苏州单荧光自噬

PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在帕金森综合征的发病中起重要作用。PINK1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,广fan表达于各组织细胞,尤其是心脏、脑、肌肉等耗能高的qi官或组织,由581个氨基酸组成,包含4个结构域:N端的线粒体定位序列(1~84)、跨膜序列(85~110)、丝氨酸/苏氨酸激酶结构域(156~509)以及C端结构域(510~581)。Parkin是由park2基因编码的一种蛋白,具有E3泛素-蛋白连接酶活性。Parkin蛋白包含465个氨基酸,由三部分构成:N端的泛素样结构域(1~76)、C端的环指结构域(226~465)以及链接区(141~225)。环指结构域是发挥泛素蛋白连接酶活性的关键。苏州单荧光自噬

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