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上海GFP-LC3单荧光自噬慢病毒

来源: 发布时间:2022年03月02日

自噬的可诱导特性:表现在2个方面,第1是自噬相关蛋白的快速合成,这是准备阶段。第2是自噬体的快速大量形成,这是执行阶段。批量降解:这是与蛋白酶体降解途径的明显区别「捕获」胞浆成分的非特异性:由于自噬的速度要快、量要大,因此特异性不是首先考虑的,这与自噬的应急特性是相适应的。自噬的保守性:由于自噬有利于细胞的存活,因此无论是物种间、还是各细胞类型之间(包括病变细胞),自噬都普遍被保留下来。除了降解方面的功能,自噬本身也是一种将胞内物质运输到溶酶体中的手段。这一过程对非特异性免疫比较重要,因为许多非特异性免疫受体(如TLR3、TLR7、TLR8、TLR9)都分布在溶酶体内表面。以往认为,外源的免疫原性物质往往通过胞吞作用进入溶酶体,而现在发现,细胞质中的免疫原性物质(如病毒RNA)也可以通过自噬被运送至溶酶体,然后与TLR相互作用。自噬在这方面的功能被认为与一些自身免疫性疾病的发生或进展有关。自噬体与溶酶体融合,成为自溶体,一些被隔离的货物被降解,然后回收以维持细胞内稳态。自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。上海GFP-LC3单荧光自噬慢病毒

在研究自噬与凋亡的关系时,人们发现细胞死亡前胞浆中存在大量的自噬体或自噬溶酶体,但这样的细胞缺乏凋亡的典型特点,如核固缩),核破裂、细胞皱缩、没有凋亡小体的形成等,被称为自噬样细胞死亡,它是一种新的细胞程序性死亡,为了与凋亡区别,被命名为TypeIIcelldeath,相应的,凋亡为TypeIcelldeath,坏死为TypeIIIcelldeath。尽管这样,但对于自噬是否是细胞死亡的直接原因目前还存在比较大的争议。到底是Celldeathbyautophagy(自噬引起死亡)还是Celldeathwithautophagy(死亡时有自噬发生,但不是直接原因)?对此,自噬研究领域“大牛”级**LevineBeth在一篇nature的Review中表达了自己的观点。由于在形态学上2者无明显区别,但通过阻断自噬,观察细胞的结局可区分开来:Celldeathbyautophagy细胞存活,而Celldeathwithautophagy细胞死亡。自噬既能阻止也能促进细胞凋亡,两种反应在生物体内普遍存在。上海GFP-LC3单荧光自噬慢病毒损坏细胞死亡时,自噬为新的细胞进入并接管提供了空间。

自噬(Autophagy),即细胞“吃掉自己”的过程,是一种细胞自我降解和循环利用胞内组分的过程。常见的自噬过程有三种类型:巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬。在现代的生物学中,“自噬”的概念是由比利时生物化学家克里斯汀·德·迪夫(ChristiandeDuve)在研究溶酶体功能时首先提出的。尽管克里斯汀·德·迪夫因发现和阐明溶酶体的功能获得了1974年诺贝尔生理和医学奖,细胞自噬的具体机理直到20世纪90年代才由日本生物学家大隅良典(YoshinoriOhsumi)阐明。大隅良典也因对细胞自噬的研究获得了2016年诺贝尔生理和医学奖。

大自噬,也就是通常说的自噬,是真核细胞蛋白降解的途径之一。自噬可以被描述为细胞质内的成分(细胞器、蛋白等)被双层膜的囊泡包裹,形成自噬体,进而传递到溶酶体进行降解的过程。详细来说,自噬过程与内涵体途径密不可分。一方面,自噬体能够与晚期内体融合形成中间囊泡终形成自噬溶酶体;另一方面,自噬体能够直接与溶酶体融合形成自噬溶酶体。无论通过哪条途径,自噬溶酶体较终通过酸性水解酶将细胞器、蛋白等消化分解。细胞本底水平的自噬发生在营养充足的条件下,可保护细胞免受错误折叠蛋白或受损细胞器的影响,从而防止某些疾病的发生(如神经退行性疾病和病症)。饥饿等也可诱导自噬的发生,通过降解大分子物质和细胞器为细胞活动提供营养和能量。在病变发生的发展的不同阶段,自噬的作用可能不同。

值得注意的是游离 GFP 标签的出现jindaibiao自噬流适度活化,当自噬流过度活化时细胞内自噬溶酶体中的 pH 值进一步降低, 其降解蛋白的能力进一步增强,因此GFP标签蛋白也被逐渐降解消失。由此可见,若观察不到游离GFP 标签,则有可能是由于自噬流阻断,也有可能是由于自噬流过度活化所致。当自噬流过度活化时,若想要观察到 GFP 标签条带则需要配合使用低浓度自噬抑制剂,如氯化铵或氯喹。这些药物能中和溶酶体中的酸性环境,又不完全抑制细胞自噬功能,但当自噬流阻断时即使使用低浓度自噬抑制剂也无法观察到游离 GFP 标签。剧烈运动下的自噬会增加生长因子,从而加速肌肉修复。辽宁细胞自噬Beclin1

RFP-GFP-LC3B慢病毒感染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下RFP-GFP-LC3B呈现弥散的黄色荧光。上海GFP-LC3单荧光自噬慢病毒

在大脑自噬过程中,可以增强线粒体功能(细胞中产生能量的部分),保持线粒体平稳运行,会让细胞可以产生更多的能量来为你的身体提供能量。自噬可以触发细胞死亡,清理已经被活性氧氧化应激所破坏而无法修复的细胞(包括旧有的和新有的),损坏细胞死亡时,它们为新的细胞进入并接管提供了空间。自噬就像对细胞进行大扫除,在自噬过程中,你体内的老的细胞膜,细胞器,其他细胞碎片,会被移除,重新换成全新的部件。用更闪亮的新版本替换所有旧的或损坏的部件。你的细胞会变得更年轻,从而使身体更加高效的运行。总之,自噬可以帮助你更长寿,更年轻,恢复的更快,你可以每天做一些事情来唤醒细胞自噬,刺激细胞自噬来使它们更新。大自噬,也就是通常说的自噬,是真核细胞蛋白降解的途径之一。上海GFP-LC3单荧光自噬慢病毒