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PCR- rSSCP 法依据RNA构象对单个碱基替代更敏感的原理，在PCR 引物上加上某类启动子，通过转录的RNA构象体的电泳迁移差异进行突变鉴别。PCR- ddF 法把PCR 产物转录，将转录物用反转录酶进行Sanger 双脱氧终止测序反应，通过观察非变性胶上经解链处理所产生的单链漂移、突变后终止片段的获得与缺失来判断突变。PCR- REF 法将RFLP 和SSCP 技术优势组合，将PCR 扩增的待测片段用5~ 6 种限制酶依次消化，混合并进行末端标记，***经变性处理并在非变性凝胶上电泳分离，从而获得来自片段长度和片段构象的双重突变信息。结构分析和遗传物质的研究在分子生物学的发展中作出了重要的贡献。浦东新区耐热分子生物学推荐货源

随着基因工程的蓬勃兴起而首先受益的产业领域就是制药工业。现已有些多肽或蛋白质药物，如人胰岛素、生长***、干扰素等能够通过“工程菌”大量生产，更多的药物则正在开发之中。疫苗的研制正在极大地促进预防医学的发展，例如，乙型肝炎疫苗、非甲非乙肝炎疫苗、轮状病毒疫苗、疟疾疫苗等等，有些已能付诸应用，有些尚在开发之中。通过蛋白质工程技术，采用定点突变的方法，还可望制造出新型的蛋白质。例如，白细胞介素 2和β干扰素是两种具有***作用的蛋白质，在其多肽链中各有三个半胱氨酸残基，但只形成一对二硫键，由于分子中含有多余的一个半胱氨酸残基，所以二个分子容易缔结合成二聚体而失活，用定点突变法改变半胱氨酸的密码子为丝氨酸密码子，就可防止二聚体的形成，从而在不损害活性的情况下**延长这两个蛋白质的半衰期，提高了疗效。上海耐热分子生物学量大从优50年代是分子生物学作为一门分支学科脱颖而出并迅速发展的年代。

1953年美国科学家J.D.沃森和英国科学家F.H.C.克里克提出了DNA的反向平行双螺旋结构（被誉为“分子生物学第二大基石”），开创了分子生物学的新纪元。1958年Crick在此基础上提出的中心法则，描述了遗传信息从基因到蛋白质结构的流动。遗传密码的阐明则揭示了生物体内遗传信息的贮存方式。1961年法国科学家F.雅各布和J.莫诺提出了操纵子的概念（“分子生物学第三大基石”），解释了原核基因表达的调控。到20世纪60年代中期，关于DNA自我复制和转录生成RNA的一般性质已基本清楚，基因的奥秘也随之而开始解开了。

50年代是分子生物学作为一门**的分支学科脱颖而出并迅速发展的年代。首先是在蛋白结构分析方面，1951年L.C.波森等提出了 α-螺旋结构，描述了蛋白质分子中肽链的一种构象。1953年F.Sanger（桑格）利用纸电泳及色谱技术完成了胰岛素的氨基酸序列的测定，开创了蛋白质序列分析的先河。接着 J.C.肯德鲁和M.F.佩鲁茨在X射线分析中应用重原子同晶置换技术和计算机技术分别于1957和1959年阐明了鲸肌红蛋白和马血红蛋白的立体结构。1965年中国科学家合成了有生物活性的胰岛素，首先实现了蛋白质的人工合成。1953年F.Sanger利用纸电泳及色谱技术完成了胰岛素的氨基酸序列的测定，开创了蛋白质序列分析的先河。

DGGE 方法需要设计特定片段比较好的PCR引物以及比较好变性条件，这一过程比较复杂，梯度变性胶的制备需要的设备较昂贵，所以在常规实验室不易实施。双链构象多态分析法双链构象多态分析（double- strand conformation analysis,DSCA） 是利用荧光标记引物，通过PCR 扩增出相关的研究片段作为荧光标记参照（fluorescence labeled reference,FLR）DNA分子。然后，用标记参照物FLR 分子与待测PCR扩增片段进行杂交。因为FLR 和样本核苷酸序列相似，杂交反应液中所有DNA的正链和反义链之间将形成双链结构。只有与带荧光标记的FLR 分子正链匹配的DNA双链，经过电泳后方可被DNA测序仪的激光检测系统所检测。首先是在蛋白结构分析方面，1951年L.C.波森等提出了 α-螺旋结构，描述了蛋白质分子中肽链的一种构象。青浦区本地分子生物学厂家供应

而一些小分子物质在生物体内的转化则属生物化学的范围；浦东新区耐热分子生物学推荐货源

所以，可检双链均有一样的FLR 正链，杂交双链的电泳迁移率可能相同，但是由于反义单链的差异双链变性程度的差异而**终造成电泳迁移率的不同。不像SSCP 技术，DSCA能够任意操纵变性双链的形成，选用不同的FLR可以达到难分样本的比较好分离效果。另外，通过调整FLR 和样本待测DNA分子的比例，可专一性增强杂交异质双链信号并减弱纯合双链信号。DSCA技术的优点还在于它依据样品经过固定检测仪的时间差，而非相同电泳时间迁移的距离差来判断突变的有无，这样就避免了诸如SSCP 等技术分析中因迁移速率差异而降低的泳动速度慢的条带检测率。另一方面，DSCA的有效检测片段长度可达1 kb。由于激光系统的介入，DSCA的灵敏度和上样量分别得以提高和降低，不到1 秒的泳动差异也足以检测。该技术已被成功地用于囊性纤维化基因（cystic fibrosis gene） 的4 种突变，以及HLA Ñ型基因中131 种等应基因的检测。浦东新区耐热分子生物学推荐货源

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