根据烈冰多年单细胞测序服务经验，为什么不建议您一味的追求高细胞数量的捕获：单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行，而细胞聚类是在区分cell和non-cell后，获得细胞基因表达谱，通过降维（pca），无监督聚类以及可视化（t-SNE）得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式，因此即使是相同的数据，在剔除几个细胞的情况下，前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时，无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据，都会对正常细胞聚类产生影响，造成聚类结果失真。这也是很多文章，特别是很多高分文章，为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时，数据量在100G左右时，可以满足分析和文章发表的多重需求。烈冰单细胞多组学测序助您探究细胞类型特异性和基因调控网络特征。江苏BD单细胞平台
对于单细胞测序而言，常常需要先构建细胞图谱，在此基础上再开展后续各项分析，并且数据分析时以细胞聚类（cellcluster）为讨论对象，而不是像常规Bulk测序一样以组别为分析对象，因此单细胞测序项目对样本入组要求没有Bulk测序那样严格，但是单细胞测序，特别是目的为图谱研究时，需要通过提高样本复杂度（增加样本数），尽可能的构建某一疾病类型、群体细胞图谱信息。因此，单细胞测序实验设计时首先需要保证生物学重复，不同样本来源的样本建议单独进行细胞解离和捕获、建库、测序，以保证捕获到足够的细胞数，单个样本分别捕获细胞时，后续分析除了整体分析以外，还可以做单样本分析，保证分析的完备准确性。武汉scRNA单细胞测序服务公司2019年，烈冰已助力发表了采用BD Rahpsody平台的单细胞风湿类文章。
现有的单细胞测序技术阵营在几个主要领域存在差别。一个是基于微流控通道的细胞与Beads的在通道内的动态结合，通过油相水相不相容的特点将结合了的细胞和Beads进行分隔，在这个空间，单个细胞的内容物释放，转录本或其他生物分析物被标记或添加索引，以便下游识别。BDRhapsody单细胞测序平台采用静态微孔技术（Cyto-Seq具有类似的技术原理）。通过微孔板的物理分隔，将一个个单个细胞和带有标签的磁珠，一对一的“框”在微反应的物理平台中。这样，每一个细胞都会结合一个磁珠，那么在每一个磁珠中上长满了不同的CellBarcode和UMIBarcode连接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，这个抓手就会使用oligodT抓住mRNA构建文库。
单细胞测序实验再样本细胞上机分选签，需要对细胞数量、细胞活性进准判断，这对SingleCell分选标记、建库、下机数据的质量都具有着决定性的作用。如若细胞计数偏高，将会影响建库的成功率；计数偏低，则会提高双细胞的比例；而细胞活率过低，就会使测序数据的利用率大打折扣，因此把好单细胞悬液质量这一关尤为重要。而在铺板过程中，由于不同操作人员手法具有不可避免的差异，不同的液体流速将直接影响单细胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody单细胞分选平台配套了专门定制的电动移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多种操作模式，来对应各种不同的操作。通过已经设定的程序来控制液体的流速，大幅度降低人为操作习惯带来的差异，保证实验操作的一致性。搭配BD FACSMelody流式分选仪，全线搭建BD Rahpsody单细胞测序平台。
烈冰生物在上海、北京、广州、西安、江西等多地部署单细胞测序实验组中心，多地部署搭建BDRhapsody单细胞实验平台，基于微孔的强大的高通量单细胞分析系统，为您提供可靠的单细胞分析工作流程，该系统可通过简单的唯恐把工作流程和多重条码标记系统，对高通量单细胞进行多组学的信息捕获，由此捕获的信息科进一步生成各种类型的二代测序（NGS）文库。之后对文库进行测序和基于NovelBrain生物大数据分析平台（云平台）的数据可视化分析，实现高位分辨率下的组织内基因的表达差异和表达丰度。烈冰生物作为BD 中国联合成立单细胞测序实验室，为推动单细胞测序技术发展贡献中国力量。西安BD Rhapsody单细胞测序服务公司
测序的革新让科学研究从个体基因差异逐渐转为个体细胞的基因差异。江苏BD单细胞平台
样本制备后的保存为了尽可能地减少转录组的变化，在对细胞进行清洗和计数后，单细胞悬液应当保存于冰上，直至用于后续的上机和文库制备步骤。在理想状况下，一旦制备好样本，应当在3min钟内将其用于下游步骤。然而，您还有必要了解各类细胞的不同性质，因为这可能会影响细胞应在冰上保存的时间，以及它们在制备后多久便应当被尽快使用。例如，有些细胞（如PBMC）如果在冰上放置一段时间，它们就开始形成团块。这些团块很难解离，增加了堵塞的风险，而且每个团块被当成单细胞计数，又降低了细胞计数的准确性。此外，有些细胞更加粘稠，形成团块的速度更快。对于这些细胞，必须尽量减少制备和使用之间的时间差。江苏BD单细胞平台
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