乙酸水溶液(5%)

杀灭曲线的建立：通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线），确定能够杀死未转染宿主细胞的较低浓度，从而筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株。建立杀灭曲线至少选择5个浓度。1、按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上，37℃，CO2过夜培养（需要更高密度，可增加接种量）。2、根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。3、第2天换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基，每个浓度做三个平行孔。4、接下来每3-4天更换新的含药物培养基。5、按照每2天进行活细胞计数，来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。通常7-10天内能够杀死绝大多数细胞的较低浓度为筛选用的工作浓度。科研实验中试剂取用应注意事项：取用少量的液体—使用胶头滴管。乙酸水溶液(5%)

单个核细胞分离步骤：Ficoll试剂混匀：首先将Ficoll试剂瓶颠倒多次混匀，使用注射器法吸取Ficoll分离液（去掉聚丙烯盖，插入注射器针头）或吸管法吸取Ficoll分离液（去掉聚丙烯盖，拉起铝环，拉开金属密封，移除银环。拿掉橡胶密封，无菌操作吸取需要的Ficoll分离液）。1.离心管加入3mLFicoll分离液。2.稀释过的血液样本小心铺到Ficoll分离液上面。注：缓慢加入样本，小心不要和Ficoll分离液混合，勿搅动。1.室温条件，水平转子离心400g，离心30-40min，可见细胞分层。2.用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层。3.无菌吸管转移单个核细胞层到无菌离心管。乙酸水溶液(5%)BMC原代分离步骤：抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液。

稳定转染细胞的筛选：1、转染48 h后，用含适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。注意：细胞处于活跃分裂状态时的杀伤效果较好。但细胞过于稠密，其效率会降低，较好将细胞稀释至丰度低于25%。2、每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间（取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果）。4、挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。5、后续更换正常培养基培养即可。

利福平溶液片有什么作用：【性状】本品滴丸为暗红色，缓冲液为无色澄明溶液。 【作用类别】 【药理毒理】利福平为半合成广谱杀菌剂，与依赖于DNA的RNA多聚酶的β亚单位牢固结合，克制细菌RNA的合成，防止该酶与DNA连接，从而阻断RNA转录过程。 【药代动力学】利福平为脂溶性，易于进入敏感菌细胞内杀死敏感菌。眼部给药吸收后可弥散至大部分体液和组织中，本品在肝脏中可被自身诱导微粒体氧化酶作用而迅速去乙酰化，成为具有克菌活性的代谢物，然后经水解形成无活性的代谢物由尿排出。本品主要经胆汁和肠道排出，亦可经乳汁排出。利福平不能经血液透析或腹膜透析除去。杀灭曲线的建立：每3-4天更换新的含药物培养基。

潮霉素 B使用方法：一、 储存液的配制（50mg/ml）称取1 g 潮霉素B（CH6362）用PBS（0.01 M）溶液或去离子水溶解，定容20ml。0.22μm滤器过滤除菌，分装于无菌冻存管，2-8℃冷藏，1年内稳定。或直接选购潮霉素B溶液（50mg/ml，CH6361）二、 工作浓度的筛选：潮霉素B用来筛选的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于开始次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定较佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；菌类300-1000μg/mL。固体试剂的取用:直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口，试管45度，并且缓缓地倒。磷酸缓冲盐粉剂(1×PBS,含钙镁)

室温条件，水平转子离心400g，离心30-40min，可见细胞分层。乙酸水溶液(5%)

利福平助溶剂：性状：白色或类白色粉末，无刺激气味，易溶于水。主要成分：医药级药物赋形剂。成分特性：赋形剂性质稳定，与主药无配伍禁忌，不产生副作用，不影响疗效，在常温下不易变形、干裂、霉变、结块、对人体无害、无生理作用，不与主药产生拮抗作用，不影响主药的含量测定等。作用机理：浅化学机理助溶，根据药物分子结构贴合相应的亲水基团，从而达到助溶目的。使用方法：利福平与助溶剂按7：3比例添加混合均匀，即得70%水溶利福平，混合后粉碎一遍效果更佳。(如需加工10-30%水溶利福平，用加工好的70%水溶剂福平加兽药辅料稀释即可。)标准：企业标准，混合后水溶利福平基本无白点，加入水中，溶解迅速至澄清， 溶解度4000PPM以上， 溶液中性弱碱， PH值7左右。注意事项：加工成水溶性原料后，应在干燥密封处保存，避免氧化!!!乙酸水溶液(5%)