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流式细胞仪检测细胞因子的应用

来源: 发布时间:2023年07月26日

免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?1)、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索比较好浓度。2)、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是比较好的时间和次数。若不行,还可高压修复。3)、组织切片本身这种抗原含量低;4)、血清封闭时间过长。5)、DAB孵育时间过短。6)、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。7)、开始做免疫组化,我建议你一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等外的方法问题。LabEx提供酶联免疫吸附实验(ELISA)检测服务!流式细胞仪检测细胞因子的应用

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?如何解决?1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是尤其重要的一条。2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;4)、非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;5)、DAB孵育时间过长或浓度过高;6)、PBS冲洗不充分,残留抗体结果增强着色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要;7)、标本染色过程中经常出现干片,这容易增强非特异性着色。生物接触标志物LabEx提供高通量蛋白组学(Olink)服务!

抗体芯片介绍:ELISA原理的高通量WB,单一样品多种分析物的检测。具有微型化、集成化、高通量的特点,可以用于检测某一特定的生理或病理过程相关蛋白的表达丰度,目前主要用于信号转导、蛋白组学、肿块物及其他疾病的相关研究。R&D的多因子固相抗体芯片•每个试剂盒可检测4个样本,每个样本可同时检测多达119个分析物,实验可在一日内完成•每个试剂盒提供4张膜,膜上监测点以复孔的形式包被捕获抗体和对照抗体•该即用型试剂盒包含抗体膜,检测抗体和缓冲液等所有组分优势和特点•使用方便,节省时间和成本•无需专门设备•高通量:1天所得到的数据相当于免疫印迹几周所得数据•样本类型多样化•每种试剂盒均验证过多种样本,如细胞裂解液,组织裂解液,细胞培养上清,血清,血浆,唾液,尿液或牛奶等•节省样本•获取相同数据点所需样本量远低于WB•比竞争对手抗体芯片所需样本量更少,获得的数据更多LabEx提供28种抗体芯片,用于人,小鼠和大鼠物种的蛋白检测相关服务,我们为您提供完整的实验结果报告,包括数据分析结果,原始数据文件,实验protocol等。

肿块物(瘤类)发病机制中的细胞因子(内源性及相关功能):Il-1(白介素1):肿块物侵袭和血管生成所必需的IL-6(白介素6):化学诱导的淋巴瘤所需IL-12(白介素12):抑制化学致肿块物作用IL-15(白介素15):促进自然杀伤T细胞白血病IFN-γ:抑制化学致肿块物作用;抑制淋巴瘤;Stat1和Rag2抑制肿块物M-CSF:促进乳腺肿块物侵袭GM-CSF:抑制淋巴瘤和肿块物TNF-α:化学诱发的皮肤肿块物所需MIF:抑制p53肿块物抑制功能TGF-β:抑制结肠肿块物Fas-Fasligand:抑制淋巴瘤发生多因子技术样本需求量少,检测指标多,可兼容血清,裂解液,脑脊液等多种生物学体液。

抗体芯片技术服务包括:1.样品蛋白质抽提:a.实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂,匀浆后抽提总蛋白。b.实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂抽提总蛋白。c.实验对象为血清,则直接进入步骤3。2.蛋白质定量:按蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。3.细胞因子抗体芯片封闭和抗体孵育a.细胞因子抗体芯片封闭后加入50-500ug蛋白质(若标本为血清,通常取100ul血清)与抗体芯片4℃孵育过夜。b.加入标记好的抗体室温孵育1小时。4.抗体芯片检测5.提供实验报告:包括详细的实验方法和芯片实验结果的各种图表和数据比较。您只需提供保存完好的标本(血清、组织或细胞、细胞上清或其他非常规液质生物样本),本公司专业的技术服务人员就可替您完成实验操作与数据分析。蛋白分析实验技术——MSD超敏电化学发光平台。msd电化学发光图片

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基于流式平台CBA:CBA(CytometricBeadArray),即微量样本多指标流式蛋白定量技术是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA的原理通过利用一系列带有荧光标记的微小、分散的微球连接特定的捕获抗体以捕捉溶液系统中的待测物,通过对应各种不同检测物的特异微球上所带有荧光强度不同从而同时测定分析样本中多种可溶性成分的数量。CBA的特点:1.能够同时对单个样本进行多种检测。2.较传统检测节省样本量9倍。3.灵敏度高、重复性好。4.所有分析只需一组标准曲线。5.避免酶联反应所致人工假象。6.节省操作和检测时间。流式细胞仪检测细胞因子的应用

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