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本实验技术要点： **细胞比较好经过饥饿处理，并且小室上下培养基的FBS有浓度差，以保证细胞可以穿透基质胶。铺细胞要均匀，滤膜底部不能产生气泡，否则会导致细胞染色不均匀，或者局部细胞无法穿透。根据细胞类型选择合适的膜孔径和膜类型。PET膜兼容***，适合绝大多数种类的细胞。侵袭实验的细胞密度比较大，一般在1 0 6cells/cm2左右，不同**细胞的接种密度、培养时间不同，需要参考文献和实验摸索。细胞太少，迁移不过去；细胞太多，可能导致正常组和实验组无差异。

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取上述200μL细胞液加入小室，下室（培养板）加入900L含有10% FBS的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同，具体参考Millicell®产品说明书。37°C孵育24至72小时，依据**细胞类型而定。孵育结束，小心取出细胞小室，吸掉小室上层培养液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min，0.5%结晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色20min，然后进行第8步或者第9步。PBS清洗两次以去除多余的染料，立即用棉签擦去滤膜上层的细胞，自然静置风干。显微镜下观察滤膜下层的细胞，随机选取不同的视野计数并算平均值。结晶紫溶解滤膜下层细胞，然后用33%醋酸脱色，将结晶紫完全洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上570nm读取OD值。这种方法可以避免视野下细胞穿透不均匀带来的误差。益启生物公司带您了解培养基详情。金山区培养基细胞培养

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主要优点 •两种过滤装置均有快速过濾的Millipore Express PLUS (PES)和**蛋白吸附的Durapore膜两种材质可选 •过滤中培养基损失极小，回收率超高 •孔径的过滤装置推荐用于去除支原体 Sterivex™过滤器 Sterivex™过滤器可以结合注射器、蠕动泵或压力装置使用，避免因倾倒或移液带来的污染。 主要优点 •比较好处理100 mL-2 L •可以直接过濾至几乎任何接收容器 •有多种高品质膜类型可供选择 不锈钢平板式过滤器 •根据不同的处理体积有90mm及142mm可供选择 •通过加压过濾来清洁或消毒液体与气体 •特氟隆镀面的支撑网 •可以将滤膜装入后整体进行高压消毒松江区细胞培养联系电话

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