进行了酵母双杂交筛选实验，结果显示 MdMPK3 可以与 MdWRKY17 相互作用（图 C），并且通过 BiFC、Co-IP 得以证实（图 D-E）。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升（图 B）。进一步的 BiFC 和 Co-IP 表明，MdMEK4 可以与 MdMPK3 相互作用（图 F-G）。体外激酶试验表明，MdWRKY17 能够被MdMEK4- MdMPK3 级联磷酸化（图 H）。综上，MdMEK4-MdMPK3 级联磷酸化 MdWRKY17。与对照相比，MdWRKY17过表达植株中水杨酸含量降低，而RNAiMdWRKY17植株中水杨酸含量升高（图A）。酵母三杂交系统原理酵母双杂交文库构建。福建发展酵母文库
通过酵母双杂筛选实验，进一步研究AaWRKY9蛋白功能，结果筛选到了与AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白，并通过Y2H、BiFC、CoIP等进行了验证确认。JAZs是JA介导的植物相应中的负向调控因子，在毛状体和老叶中高表达，在芽尖和嫩叶中表达量低。为确认AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促进青蒿素积累过程中的转录***功能，通过双荧光素酶报告基因检测实验发现，当AaWRKY9与AaJAZ9共表达时，其转录活性被抑制，而使用MeJA处理后，这种抑制作用被抵消，且AaWRKY9转录活性增强，反向验证实验结果一致。说明JA可以通过降解JAZ9，提高AaWRKY9转录活性，促进青蒿素生物合成。湖北酵母文库领域酵母文库筛选研究多年建库与筛选经验验证。
酵母文库实验本研究鉴定了一个可以与MdMYB9相互作用的蛋白MdTRB1。实验表明，MdTRB1可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1与MdMYB9结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而MdTRB1与MdJAZ1的结合，可以干扰其与MdMYB9的互作，进而负向调控MdTRB1介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明，JAZ1-TRB1-MYB9复合物可以动态调控JA介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究JA对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。
母文库实验由欧易生物完成。2021年3月16日，宁波大学陈剑平院士、孙宗涛研究员为共同通讯作者，在PNAS杂志（IF:9.412）在线发表了题为“AclassofindependentlyevolvedtranscriptionalrepressorsinplantRNAvirusesfacilitatesviralinfectionandvectorfeeding”的研究论文，深入报道了在不同植物RNA病毒中一种***存在的、通过劫持茉莉酸信号途径以协同促进病毒传播和介体昆虫摄食的新机制。植物病毒基因组通常*编码少数几个蛋白，它们必需依赖寄主植物才能完成自身的侵染和增殖。因此植物病毒往往通过其编码的蛋白来劫持或者利用寄主因子来实现自身的复制，并在植物体内传播，产生系统性***。欧易生物技术有限公司酵母文库 技术服务一站式服务。
酵母双杂交技术，自创建以来被广泛应用于蛋白互作研究领域，在生命科学的基础探秘研究中起着重要作用。然而该技术设计初衷，*是斯坦利先生为了完成申请学校经费的目的。该技术设计巧妙，它的许多优点在设计之初并未显现，反而在这么多年的高频使用和进一步开发利用过程中越发明显。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）尽管酵母杂交技术揭示了蛋白质结合位点的详细信息，但操作简单。只需2个质粒+1个菌株即可完成，且有不同体系方便选择。（2）该技术利用比较好的DNA结合位点，有效的***结构域和友好的报告基因系统，可以放大弱互作的信号。（3）该技术可用于各种物种的蛋白互作检测，具有物种普适性，尤其是人类蛋白。（4）衍生技术具有更***的应用，可扩展到检测蛋白质与DNA、蛋白质与RNA、蛋白质与小分子以及其他组合之间的相互作用，甚至可实现将生理相互作用与表型数据直接关联。当然，做过酵母杂交实验的小伙伴应该都了解，互作结果的判断，往往要等酵母生长好几天才能看出来（当然，小欧认为这在伟大的科研事业过程中算不上啥），互作强弱也是主观判断性较强，存在假阳性。酵母有那些结构及各部分的功能是什么。福建发展酵母文库
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酵母文库实验实验表明，MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1 与 MdMYB9 结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而 MdTRB1 与 MdJAZ1 的结合，可以干扰其与 MdMYB9 的互作，进而负向调控 MdTRB1 介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明，JAZ1-TRB1-MYB9 复合物可以动态调控 JA 介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究 JA 对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。本研究鉴定了一个可以与 MdMYB9 相互作用的蛋白 MdTRB1。实验表明，MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。福建发展酵母文库
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