酵母双杂交技术，自创建以来被广泛应用于蛋白互作研究领域，在生命科学的基础探秘研究中起着重要作用。然而该技术设计初衷，*是斯坦利先生为了完成申请学校经费的目的。该技术设计巧妙，它的许多优点在设计之初并未显现，反而在这么多年的高频使用和进一步开发利用过程中越发明显。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）尽管酵母杂交技术揭示了蛋白质结合位点的详细信息，但操作简单。只需2个质粒+1个菌株即可完成，且有不同体系方便选择。（2）该技术利用比较好的DNA结合位点，有效的***结构域和友好的报告基因系统，可以放大弱互作的信号。（3）该技术可用于各种物种的蛋白互作检测，具有物种普适性，尤其是人类蛋白。（4）衍生技术具有更***的应用，可扩展到检测蛋白质与DNA、蛋白质与RNA、蛋白质与小分子以及其他组合之间的相互作用，甚至可实现将生理相互作用与表型数据直接关联。当然，做过酵母杂交实验的小伙伴应该都了解，互作结果的判断，往往要等酵母生长好几天才能看出来（当然，小欧认为这在伟大的科研事业过程中算不上啥），互作强弱也是主观判断性较强，存在假阳性。合作文章上百篇，平均影响因子高达7.124 欧易生物酵母文库。安徽欧易生物酵母文库报价
酵母双杂交、GSTpull-down实验显示，SWC6可以直接与HY5、HYH相互作用（图A-C）。pull-down实验显示ARP6同样可以与HY5、HYH相互作用（图D）。split-LUC、Co-IP实验证实HY5可以与SWC6、ARP6结合（图E-J）。下胚轴表型分析显示，蓝光下arp6hy5hyh三突变体下胚轴长度明显大于arp6突变体、hy5hyh双突变体，表明ARP6和HY5有可能通过不同途径调控下胚轴的发育。Semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验显示，蓝光下，在 CRY1 存在下，SWC6 与 ARP6 的结合***增强。表明蓝光***的 CRY1 可能通过蓝光依赖的 CRY1-SWC6/ARP6 相互作用增强 SWC6 与 ARP6 的结合。安徽应用酵母文库做什么欧易生物提供的酵母杂交技术服务已经协助科研用户发表了Science、Cell、PNAS等多家前列期刊杂志。
通过酵母双杂交文库进行了互作蛋白的筛选，结果显示TaTIFY9可以与TaSRL1相互作用（下图A），并通过Bi-FC、荧光互补实验得以证实（图B-C）。TaTIFY9属于茉莉酸信号途径关键因子JAZ家族的成员之一。RT-PCR显示TaTIFY9也主要表达于小麦根部，外源施加茉莉酸可以***诱导TaTIFY9表达。这一结果表明，TaSRL1可能通过与TIFY9结合介导了茉莉酸对根生长的抑制。已有研究表明 ERF 蛋白可以特异性结合到靶基因启动子序列中的 GCC-box 序列。TaSRL1 属于 ERF 家族。在生长素转运基因 TaPIN2 的启动子序列中含有一个 GCC-box 序列。酵母单杂交实验显示，TaSRL1 可以直接与 TaPIN2 启动子结合并***其表达（图 A），但该***作用会被TaSRL1的互作蛋白TaTIFY9 所抑制（图 B和C）。
利用酵母双杂交技术进行筛选，结果显示SP8可以与水稻OsMYC3蛋白相互作用，并且二者互作关系通过酵母一对一互作、BiFC、Co-IP、LCI实验得以验证（图A-C）。利用截短的SP8进行酵母一对一互作和Co-IP检测表明，与OsMYC3的结合依赖于SP8的NTP结构域（图D-E）；同样，OsMYC3的TAD结构域也是二者互作所必不可少的（图F）。酵母双杂交、BiFC实验表明，OsMYC3可以与OsJAZ相互作用。经茉莉酸处理，野生对照株根的长度明显被抑制、一系列JA生物合成和信号传导相关基因表达量上升，但Osmyc3突变体中抑制程度减轻、JA相关基因表达量上升减少。酵母文库是欧易生物***服务项目。
酵母单杂交测试：为验证该文库在Y2H和Y1H体系中的有效性，作者以OsMADS1为诱饵筛选水稻转录因子文库，进行了酵母双杂交测试。以Ghd7的启动子片段为诱饵，进行了酵母单杂交测试。结果显示我们的水稻转录因子文库可以有效且高通量的检测蛋白-水稻TF、DNA-水稻TF间的相互作用。另外，该研究中指出，使用该文库筛选鉴定蛋白-TF互作，采用mating法较为方便，即Y2HGold-Bait诱饵菌液与Y187-TF文库菌液一对一杂交。而筛选鉴定DNA-TF互作，采用Y1HGold系统，即Y1HGold-pomoter筛选TF文库质粒更简单高效。此外，可通过降低筛选压力处理，进行弱相互作用的检测。关于酵母杂交文库构建及筛选你需要知道这些。湖南酵母文库领域
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