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来源: 发布时间:2022年12月21日

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本研究利用水稻转录因子文库筛选,绘制了水稻转录因子和菌根共生相关基因之间的调控网络。该网络受到保守的磷感应途径统一控制,以磷酸盐饥饿响应因子(PHR)为中心。PHRs 是菌根共生所必需的,通过 P1BS 顺式作用元件调控菌根共生相关基因表达。高磷条件下,SPX蛋白抑制 OsPHR2 介导的对菌根共生相关基因表达的调控,进而抑制菌根共生。过表达 OsPHR2 可以部分拮抗磷介导的对菌根共生的抑制作用。本研究发现,植物直接营养吸收和通过菌根共生的间接营养吸收,都受到相同的磷信号网络统一调控。本研究将有助于高效用磷植株的培育。

通过传统的酵母双杂交系统,以PtDAL1为诱饵,筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆,10个一组,挑选到1个96孔板的PCR板孔中,获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板,进行PCR扩增,并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物,进行打断后构建二代测序文库,通过NGS测序,获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据,获得阳性克隆基因信息(去冗余后获得135个互作子,包含21个TFs,2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白,部分见表1)。挑选重要的候选基因进行一对一验证(图2)。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白(DIPs)的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析,并对DIPs进行GO注释(图3)。综合生信分析结果,构建针叶树老化途径的调控模型(图4)。酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸。

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