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天津酵母文库使用

来源: 发布时间:2022年05月17日

酵母单杂交测试:为验证该文库在Y2H和Y1H体系中的有效性,作者以OsMADS1为诱饵筛选水稻转录因子文库,进行了酵母双杂交测试。以Ghd7的启动子片段为诱饵,进行了酵母单杂交测试。结果显示我们的水稻转录因子文库可以有效且高通量的检测蛋白-水稻TF、DNA-水稻TF间的相互作用。另外,该研究中指出,使用该文库筛选鉴定蛋白-TF互作,采用mating法较为方便,即Y2HGold-Bait诱饵菌液与Y187-TF文库菌液一对一杂交。而筛选鉴定DNA-TF互作,采用Y1HGold系统,即Y1HGold-pomoter筛选TF文库质粒更简单高效。此外,可通过降低筛选压力处理,进行弱相互作用的检测。众所周知,酵母杂交技术存在一定的假阳性。天津酵母文库使用

酵母双杂交文库:本研究通过蓝/红光诱导青蒿中青蒿素生物合成基因的表达,使用转录组分析确定了一个WRKY转录因子AaWRKY9,可明显***青蒿素生物合成相关基因的表达。实验表明AaWRKY9通过光依赖JA信号通路调节,在青蒿素生物合成中发挥重要作用,AaWRKY9通过与AaDBR2和AaGSW1的启动子结合正向调节青蒿素的积累。此外,JA信号通路中的抑制因子AaJAZ9与AaWRKY9相互作用,并抑制其转录***活性,而在MeJA存在情况下,AaJAZ9被降解,AaWRKY9的转录***活性增加,进而促进青蒿素生物合成基因的表达。酵母双杂交文库结果表明,AaWRKY9有助于光和JA信号调节青蒿素的生物合成,为两种信号途径在植物次生代谢物合成中的整合调控提供了新见解。天津酵母文库使用酵母膜系统文库构建与筛选技术。

酵母文库实验:本研究报道了 OsNF-YB9 和 OsNF-YB7 在水稻中呈现亚功能化。OsNF-YB7 主要在胚中表达,而 OsNF-YB9 主要在发育中的胚乳中表达。在拟南芥 lec1-1 中异源表达 OsNF-YB9  OsNF-YB7 可以弥补 lec1-1 缺陷。OsNF-YB9 功能缺失导致种子发育异常,种子变长、变窄、变薄,垩白率较高。此外,osnf-yb9 中淀粉合成相关基因的表达紊乱。OsNF-YB9 可以与主要在水稻胚乳中表达的蔗糖合酶蛋白激酶 SPK 相互作用。spk 敲除突变体种子与 osnf-yb9 突变体种子都表现出垩白增加的表型。OsNF-YB9 在水稻和拟南芥中的异位表达导致了种子变小。综上表明,OsNF-YB9 在水稻种子发育中起到关键调控作用。

通过传统的酵母双杂交系统,以PtDAL1为诱饵,筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆,10个一组,挑选到1个96孔板的PCR板孔中,获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板,进行PCR扩增,并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物,进行打断后构建二代测序文库,通过NGS测序,获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据,获得阳性克隆基因信息(去冗余后获得135个互作子,包含21个TFs,2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白,部分见表1)。挑选重要的候选基因进行一对一验证(图2)。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白(DIPs)的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析,并对DIPs进行GO注释(图3)。综合生信分析结果,构建针叶树老化途径的调控模型(图4)。酵母文库筛库欧易生物。

酵母文库筛选:为了系统地揭示调控丛枝菌根共生的转录因子,研究者以51个水稻基因的启动子为诱饵,利用包含1570个水稻全长转录因子的文库进行了酵母单杂交筛选。这51个基因主要是已报道的参与或调节菌根共生的基因。文库筛选发现了一个由266个转录因子和47个启动子高度连接的网络,称之为"丛枝菌根共生酵母单杂交网络(YAM)"。平均每个启动子可以和4个转录因子互作。266个转录因子分属至少11个转录因子家族。72%(192个)的YAM转录因子在根中存在表达(FPKM>1)。与非定殖根相比,19个YAM转录因子在丛枝菌根***定殖的根中表达上调。欧易生物酵母文库项目发表 Science 封面文章欧易生物。江苏发展酵母文库报价

Gateway方法酵母双杂交文库构建核系统与膜系。天津酵母文库使用

进行了酵母双杂交筛选实验,结果显示 MdMPK3 可以与 MdWRKY17 相互作用(图 C),并且通过 BiFC、Co-IP 得以证实(图 D-E)。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升(图 B)。进一步的 BiFC 和 Co-IP 表明,MdMEK4 可以与 MdMPK3 相互作用(图 F-G)。体外激酶试验表明,MdWRKY17 能够被MdMEK4- MdMPK3 级联磷酸化(图 H)。综上,MdMEK4-MdMPK3 级联磷酸化 MdWRKY17。与对照相比,MdWRKY17过表达植株中水杨酸含量降低,而RNAiMdWRKY17植株中水杨酸含量升高(图A)。天津酵母文库使用

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